TINCIÓN SUPRAVITAL CON AZUL DE METILENO

Fecha: 7 de noviembre, 2014

Fundamento: Observar, con el microscopio, una tinción supravital de sangre, utilizando como colorante el azul de metileno.

Materiales: 

-Para el colorante: matraz aforado, embudo, varilla agitadora, vidrio de reloj, báscula, vaso de precipitado, espátula, pipeta pasteur, parafilm.

-Para la muestra: microscopio, portaobjetos y cubreobjetos, tubos de hemólisis, gradilla, pipeta pasteur, parafilm, lanceta, gasas.

Reactivos y sustancias: azul de metileno, oxalato potásico, agua destilada, alcohol.

Muestra: sangre capilar fresca.

Desarrollo:

-Preparamos el colorante de la siguiente manera:

• ·         Con un vidrio de reloj pesamos 0’5g de azul de metileno y 1’6g de oxalato potásico. Lo añadimos a un vaso de precipitado y le echamos agua destilada.
• ·         Una vez disuelto, con la ayuda de un embudo y la varilla, lo añadimos en un matraz aforado (de 100ml).
• ·         Vamos añadiendo agua hasta enrasar el matraz. Tapamos con un parafilm y homogenizamos.

-Con una pipeta pasteur, añadimos dos gotas del colorante hecho en un tubo de hemólisis. Después  con la ayuda de una lanceta (desinfectando primero el dedo con alcohol y desechando la primera gota de sangre), añadimos dos gotas de sangre en el mismo tubo de hemólisis.

-Tapamos el tubo con parafilm y dejamos la mezcla en reposo durante 10 minutos.

-Después de ese tiempo, cogemos una o dos gotas de la mezcla (con una pipeta pasteur) y la colocamos en un portaobjetos. Cubrimos la mezcla con un cubreobjetos.

-Colocamos la preparación en la platina del microscopio y la observamos con el objetivo de 40x.

Observaciones: Las tinciones de tejido o células vivas pueden ser: tinciones vitales (introducción de un colorante en la circulación de un organismo vivo) o tinciones supravitales (emplean el colorante sobre células o tejidos vivos aislados del organismo. En este caso es una tinción supravital.

Los colorantes vitales más utilizados son: el rojo neutro, el verde Jano y el azul de metileno. En este caso utilizaremos el azul de metileno que tiñe núcleos y algunas estructuras celulares.

Resultado:

Interpretación de los resultados: Se pueden apreciar los núcleos celulares teñidos de azul, mientras los glóbulos rojos se ven, más o menos, como en la práctica de la sangre en fresco ya que no tienen  núcleo.

Hoja de trabajo:
1.¿En qué se diferencian una tinción vital de una supravital? En las tinciones vitales se introducen en el organismo vivo mientras que las supravitales emplea el colorante sobre células o tejidos vivos aislados del organismo
2.¿Cuáles son los colorantes vitales más utilizados? El rojo neutro, el verde Jano y el azul de metileno.
3.¿Cuáles son las ventajas de la tinción supravital?
4.¿Cuáles son los inconvenientes? La observación debe ser rápida ya que las células no permanecen vivas mucho tiempo.