DETERMINACIÓN RÁPIDA DE HEMOGLOBINA

Fecha:  22 de mayo, 2015

Fundamento:  Determinar la concentración de hemoglobina, justo antes de una donación, para observar si esta dentro de los valores permitidos.

Material:  vasos de precipitado, lanceta, gasas, embudo, matraz aforado, vidrio de reloj, espátula, varilla agitadora, probeta, micropipeta
Reactivos: sulfato de cobre, agua destilada, alcohol 
Muestra:  sangre capilar
Desarrollo: 
-Primeramente, preparamos la solución de sulfato de cobre de la siguiente manera:

• Mezclamos 17 g de sulfato de cobre en 100 ml de agua destilada (en el matraz aforado), esa será nuestra solución madre.
• A esa mezcla le añadimos 0'74 ml más de agua destilada.
• En una probeta, mezclamos 51 ml de la solución madre con 49 ml de agua destilada.

-En un vaso de precipitados, añadimos solución de sulfato de cobre.
-Con una lanceta, nos pinchamos en dedo y depositamos la gota en el vaso de precipitados con la solución de sulfato de cobre.
-Esperamos y observamos si la gota precipita
Observaciones: Si la gota problema cae libremente a través de la solución de sulfato de cobre, tiene una densidad mayor que 1'052 g/cm3 por lo que esa persona podrá ser donante. En el caso contrario la persona tendrá una densidad menor y por lo tanto no podrá ser donante.
Resultados:

Interpretación de los resultados: Las gotas de sangre han caído libremente por la solución de sulfato de cobre, por lo tanto la persona de la sangre problema puede ser donante.
Hoja de trabajo
1.¿Cuál es el valor mínimo de hemoglobina que debe tener una mujer antes de la donación? El valor mínimo en mujeres es de 12'5 g/dl

2.¿Con qué otra solución comparamos la densidad de sangre? La comparamos con una solución de sulfato de cobre.

DETERMINACIÓN DE UN Du

Fecha:  20 de mayo, 2015

Fundamento:  Realizar la prueba de Coombs indirecta, para observar en la sangre problema si existe un antígeno D débil (Du)

Material:  tubos de centrífuga, centrífuga, pipetas pasteur, gradilla, baño de agua, reloj

Reactivos: Suero Anti-D, suero de Coombs, suero fisiológico
Muestra: Hematíes de la sangre problema en suspensión al 5%
Desarrollo: 
-En un tubo, añadimos una gota de suero anti-D y una gota de la suspensión de hematíes al 5% y lo mezclamos suavemente
-Incubamos el tubo a 37ºC durante 30-45 minutos.
-Después de incubar realizamos lavado de los hematíes, de la siguiente manera:

• En el tubo añadimos suero fisiologico (unos 4 ml) y añadimos en otro agua destilada para compensar.
• Centrifugamos el tubo a 2.000 rpm durante 4 minutos
• Después de centrifugar, retiramos el sobrenadante
• Repetimos el proceso dos veces mas
• Decantamos por completo el sobrenadante final

-Añadimos sobre el sedimento hemático una gota de suero de Coombs y mezclamos suavemente.
-Centrifugamos el tubo a 1.000 rpm durante 1 minuto
-Observamos si existe aglutinación
Observaciones: Para evitar falsos positivos (si existe aglutinación) debido a una sensibilización de los hematíes in vivo, debemos realizar una prueba de Coombs directa con los hematíes del problema. Este nos servirá como control negativo.
Resultados: 

Interpretación de los resultados:  Si aglutina el resultado es positivo, por lo tanto la sangre problema contiene el antígeno Du. En caso de no salir aglutinación el Rh será negativo. En nuestro caso los hematíes no han aglutinado, por lo tanto nuestra sangre problema es Rh negativo.
Hoja de trabajo
1.¿Qué contiene el suero de Coombs? El suero de Coombs contiene anticuerpos antiglobulina humana

2.¿Qué se detecta con la prueba directa? Detectamos anticuerpos incompletos que han sensibilizado los hematíes in vivo

3.¿Qué podemos detectar con la prueba indirecta? Detectamos anticuerpos incompletos libres en el suero, o poner de manifiesto la presencia de antígenos débiles en la membrana de los hematíes

4.¿Qué buscamos en la sangre del paciente? Buscamos si puede tener un antígeno D débil

5.¿Qué ocurre si el control es positivo? Ha habido una sensibilización prévia de los hematíes in vivo, por lo que los resultados no son válidos.

DETERMINACIÓN DEL FENOTIPO Y GENOTIPO DEL SISTEMA Rh

Fecha:  7 de mayo,2015

Fundamento:  Determinar el fenotipo del sistema Rh enfrentando los hematíes problema con los sueros anti-D, anti-C, anti-E, anti-e y anti-c, y con el fenotipo buscar el genotipo más probable

Material:  Tubos de centrífuga, centrífuga, rotulador de vidrio, pipetas pasteur, gradilla, visualizador luminoso

Reactivos:  Sueros anti-D, anti-C, anti-E, anti-c,anti-e y suero salino
Muestra:  Suspensión de hematíes al 5% (véase práctica LX, en desarrollo)
Desarrollo:  
-Rotulamos cinco tubos de centrífuga, cada uno con la letra D, C, E, c y e.
-Añadimos una gota de suspensión de hematíes a cada tubo y una gota del suero correspondiente.
-Centrifugamos todos los tubos a 1.000 rpm durante 1 minuto
-Observamos si existe aglutinación o no con e visualizador luminoso
Observaciones: Para observar si existe aglutinación o no, golpeamos suavemente con los dedos en el fondo del tubo par despegar el botón hemático, si existe algutinación se observará grumos de color rojo.

Resultados: 

Interpretación de los resultados:  
En fenotipo obtenido es el siguiente: 

El/ los posible/s genotipo/s se puede/n obtener mediante esta tabla:

Por lo tanto, los posibles genotipos de la sangre problema son: dCe/dcE o dCE/dce

Hoja de trabajo
1.¿Qué antisueros se utilizan en esta técnica? Los antisueros anti-D, anti-C, anti-E, anti-c y anti-e 

2.¿Por qué no existe suero anti-d? Porque no existe el antígeno d ni el anticuerpo anti-d

3.¿Qué expresan los cinco resultados obtenidos? Expresan el fenotipo de la sangre analizada

4.Si la sangre es Rh+, ¿puede determinarse exactamente su genotipo con respecto al sistema Rh? Exactamente no se podría ya que no se puede saber  si es Rh + heterozigotico o homozigotico

5.Si los resultados obtenidos son: D-, C-, E+, c+ y e-; ¿Cuál es el genotipo posible de esta sangre? El genotipo será dcE/dcE.

DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh EN TUBO

Fecha: 5 de mayo, 2015

Fundamento: Determinar el grupo Rh de la muestra enfrentándolo al suero anti-D

Material: Tubos de centrífuga, pipetas pasteur, centrífuga, rotulador de vidrio, gradilla, vasos de precipitado,visualizador luminoso

Reactivos:  Suero anti-D, albúmina al 30% y suero fisiológico
Muestra:  Sangre venosa anticoagulada
Desarrollo:  
-Debemos obtener una suspensión de hematíes al 5% de la sangre problema de la siguiente manera:

• Añadimos 0'5 ml de la sangre problema en un tubo de centrífuga y lo rellenamos con suero fisiológico.
• Lo metemos en la centrífuga, y centrifugamos a 2.000rpm durante 4 minutos.
• Extraemos el sobrenadante y repetimos la operación dos veces más.
• Después de los tres lavados, añadiremos 250 microlitros de hematíes lavados en un tubo con 475 ml de suero salino y homogenizamos.

-Rotulamos dos tubos limpios con las letras D y A 
-En el tubo D añadimos una gota de suero anti-D y en el tubo A una gota de albúmina bovina al 30%
-A cada tubo le añadimos una gota de la suspensión de hematíes al 5% y agitamos suavemente para mezclar el contenido de los tubos.
-Centrifugamos los tubos a 1.000 rpm durante un 1 minuto.
-Después de la centrifugación observamos si ha habido aglutinación en el visualizador luminoso.
Observaciones:  El tubo con albúmina es un control negativo, por lo que si resulta una aglutinación el resultado de la prueba no es válido. Para ver si hay aglutinación o no se debe golpear suavemente el fondo de los tubos para despegar el botón hemático, si se resuspende es negativo y di se forman grumos de color rojo es positivo.

Resultados: 

Interpretación de los resultados:  Como se observa en la imagen, los dos tubos se han resuspendido por lo tanto el Rh de la muestra es negativo.
Hoja de trabajo
1.¿Por qué utilizamos el control de albúmina? Porque el control de albúmina es negativo y así evitamos los falsos positivos

2.¿Qué ocurre si no aparece aglutinación en el tubo D? El Rh de la sangre problema es negativo

3.¿Qué debemos detectar mediante un Coombs indirecto? Debemos comprobar que el paciente no posee un Du

4.¿Cómo se prepara la muestra problema? Lavando los hematíes de la muestra problema y haciendo una suspensión de hematíes al 5%

DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh EN PORTA

Fecha: 5 de mayo, 2015

Fundamento: Determinar el grupo Rh, enfrentando la sangre problema al suero anti-D

Material:  Portaobjetos, palillos agitadores, lancetas, gasas, visualizador luminoso, rotulador de vidrio

Reactivos:alcohol, suero anti-D y albúmina bovina al 30%
Muestra: Sangre capilar
Desarrollo:  
-Dividimos el portaobjetos en dos secciones con el rotulador de vidrio y marcar una con la letra S (de suero) y otro con la letra A (de albúmina).
-Con la lanceta nos pinchamos un dedo, y en cada sección añadimos una gota de sangre.
-Añadimos una gota de suero anti-D en la sección S y una gota de albúmina, en la sección A.
-Con los palillos mezclamos la sangre con el suero y la albúmina.
-Colocamos el porta en un visualizador luminoso y lo agitamos un poco para observarlo.
-Anotamos los resultados de la clase y realizamos una gráfica
Observaciones: La aglutinación se favorece con el calor, por lo que es imprescindible colocarlo en el visualizador luminoso para observar si hay aglutinación (aparición de grumos rojos sobre un fondo claro).

Resultados: 

Los resultados de toda la clase son:

Y la gráfica sería así: Gráfica grupo Rh

Interpretación de los resultados: En la sección S, se puede observar que existe aglutinación, por lo tanto el grupo Rh es positivo.
Hoja de trabajo
1.¿Qué tipo de muestra empleamos en esta técnica? Utilizamos sangre capilar

2.¿Para que se utiliza el visualizador? Para observar la aglutinación (si hay) ya que el calor favorece la aglutinación.

3.¿Qué puede dar lugar a falsas aglutinaciones? Pequeños coágulos de fibrina contenidos en la muestra.

4.¿Qué ocurre si aglutina la sección A? No se puede informar de los resultados, ya que esta sección debe ser negativa.

DETERMINACIÓN SÉRICA DEL GRUPO AB0

Fecha: 29 de abril, 2015

Fundamento: Determinar el grupo sanguíneo AB0 enfrentando el suero problema a hematíes de cada grupo (A1, A2, B y 0)

Material: Tubos de centrífuga, pipetas pasteur, centrífuga, rotulador de vidrio, gradilla, vasos de precipitado
Reactivos:  Hematíes del grupo A1, del grupo A2, del grupo B, del grupo 0 y de la sangre problema.
Muestra:  Plasma, obtenido centrifugando la sangre problema.
Desarrollo:  
-Realizamos un lavado de hematíes de la sangre problema de la siguiente manera:

• A los hematíes obtenidos, después de centrifugarlos y extraer el plasma, le añadimos unos 3ml de suero salino.
• Lo centrifugamos durante 4 minutos a 2.000 rpm.
• Extraemos el sobrenadante y repetimos la operación dos veces más.

-Preparamos una suspensión de hematíes al 5%: añadimos 250 microlitros de hematíes y 4'75 ml de suero salino y homogenizamos.
-En cada tubo de ensayo le escribimos una letra diferente (A1, A2, B, 0 y C de control)
-Añadimos 2 gotas de plasma a cada uno de los tubos.
-Añadimos una gota de la suspensión de hematíes que se corresponda con la letra del tubo rotulado. Y en el C, en forma de control, los hematíes propios del plasma.
-Centrifugamos los tubos a 1.000 rpm durante 1 minuto y observamos.
Observaciones: Para ver si ha habido aglutinación en los tubos, golpearemos el extremo inferior del tubo para despegar el sedimento hemático y si aparecen unos grumos rojos flotando en un líquido claro es que hay aglutinación

Resultados: 
Interpretación de los resultados: 
Hoja de trabajo
1.¿Qué son los hematíes tipados? 

2.¿A qué dilución empleamos los hematíes del paciente? Deben estar a una dilución del 5%

3.¿Qué clase de muestra se emplea en esta muestra?Suero obtenido mediante coagulación de la sangre. 

4.¿Qué ocurre cuando el tubo C presenta aglutinación? Cuando el tubo C presenta aglutinación se debería repetir las pruebas con otro lavado de hematíes ya que el tubo C debe ser un control negativo.