DETERMINACIÓN DE UN Du

Fecha:  20 de mayo, 2015

Fundamento:  Realizar la prueba de Coombs indirecta, para observar en la sangre problema si existe un antígeno D débil (Du)

Material:  tubos de centrífuga, centrífuga, pipetas pasteur, gradilla, baño de agua, reloj

Reactivos: Suero Anti-D, suero de Coombs, suero fisiológico
Muestra: Hematíes de la sangre problema en suspensión al 5%
Desarrollo: 
-En un tubo, añadimos una gota de suero anti-D y una gota de la suspensión de hematíes al 5% y lo mezclamos suavemente
-Incubamos el tubo a 37ºC durante 30-45 minutos.
-Después de incubar realizamos lavado de los hematíes, de la siguiente manera:

• En el tubo añadimos suero fisiologico (unos 4 ml) y añadimos en otro agua destilada para compensar.
• Centrifugamos el tubo a 2.000 rpm durante 4 minutos
• Después de centrifugar, retiramos el sobrenadante
• Repetimos el proceso dos veces mas
• Decantamos por completo el sobrenadante final

-Añadimos sobre el sedimento hemático una gota de suero de Coombs y mezclamos suavemente.
-Centrifugamos el tubo a 1.000 rpm durante 1 minuto
-Observamos si existe aglutinación
Observaciones: Para evitar falsos positivos (si existe aglutinación) debido a una sensibilización de los hematíes in vivo, debemos realizar una prueba de Coombs directa con los hematíes del problema. Este nos servirá como control negativo.
Resultados: 

Interpretación de los resultados:  Si aglutina el resultado es positivo, por lo tanto la sangre problema contiene el antígeno Du. En caso de no salir aglutinación el Rh será negativo. En nuestro caso los hematíes no han aglutinado, por lo tanto nuestra sangre problema es Rh negativo.
Hoja de trabajo
1.¿Qué contiene el suero de Coombs? El suero de Coombs contiene anticuerpos antiglobulina humana

2.¿Qué se detecta con la prueba directa? Detectamos anticuerpos incompletos que han sensibilizado los hematíes in vivo

3.¿Qué podemos detectar con la prueba indirecta? Detectamos anticuerpos incompletos libres en el suero, o poner de manifiesto la presencia de antígenos débiles en la membrana de los hematíes

4.¿Qué buscamos en la sangre del paciente? Buscamos si puede tener un antígeno D débil

5.¿Qué ocurre si el control es positivo? Ha habido una sensibilización prévia de los hematíes in vivo, por lo que los resultados no son válidos.