TINCIÓN DE GIEMSA

Fecha: 11 de noviembre, 2014.

Fundamento: Realizar una tinción de Giemsa, para la visualización de las diferentes estructuras celulares.

Material: Microscopio, 2 portaobjetos, cristalizador, puente de tinción, pipetas Pasteur y tubos de ensayo.

Reactivos y sustancias: Colorante Giemsa, solución tampón pH 7’2, metanol, aceite de inmersión.

Muestra: sangre capilar o sangre venosa anticoagulada (heparina o EDTA).

Desarrollo:

-Preparamos una extensión sanguínea (véase Práctica VII).

-Colocamos el puente de tinción sobre el cristalizador, y sobre el puente colocamos la extensión.

-Cubrimos la extensión con metanol durante 3 minutos. Lo escurrimos y lo dejamos secar.

-Diluimos, en un tubo de ensayo, 0,2 ml de Giemsa con 2 ml de solución tampón pH 7’2 y lo homogenizamos.

-Con la ayuda de una pipeta Pasteur, cubrimos toda la extensión con la dilución de Giemsa y lo dejamos actuar durante 25 minutos.

-Transcurrido ese tiempo, escurrimos y lavamos la extensión con agua del grifo y después lo lavamos con solución tampón pH 7’2 hasta eliminar los restos del colorante y lo dejamos secar en posición vertical.

-Una vez seca la extensión colocamos una gota de inmersión para visualizarla con el objetivo de 100x en el microscopio.

Observaciones: Al observar la extensión por el microscopio no se pueden observar glóbulos blancos ya que es de la sangre guardada en el laboratorio y lleva mucho tiempo, por lo tanto los neutrófilos han desaparecido ya.

Resultados:

Interpretación de los resultados: En la extensión se pueden observar los eritrocitos oscuros y las plaquetas de color violeta.

Hoja de trabajo:

1.¿Cuáles son los anticoagulantes más adecuados para esta técnica? Heparina o EDTA

2.¿Con qué reactivo fijamos el frotis? Lo fijamos con metanol

3.¿Cuánto tiempo debe actuar el colorante en el frotis? El colorante debe actuar durante 25 minutos.