DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA

Fecha: 19 de enero, 2015

Fundamento: Determinar la cantidad de hemoglobina en sangre, utilizando la técnica de la cianmetahemoglobina, mediante cálculos y mediante curva de calibración.

Material: Tubos de ensayo, gradilla, espectrofotómetro, micropipeta, vaso de precipitado, pipeta (5ml), prepipeta, rotulador de vidrio y cubetas de espectrofotómetro.

Reactivos: Hemoglobin 50X (Ferricianuro de potasio (0'60mmol/l), cianuro de potasio (77mmol/l) y dihidrogeno fosfato de potasio (2mmol/l)) y patrón de hemoglobina (a diferentes concentraciones). 
Muestra:  Sangre venosa anticoagulada con EDTA.
Desarrollo: 
-Preparamos las diferentes concentraciones  del patrón de hemoglobina:

• Patrón 1: cogemos 1 ml del patrón de la casa comercial (concentración: 15g/dl).
• Patrón 2: cogemos 0'5 ml del patrón comercial y le añadimos 0'5 ml de agua destilada (concentración: 7'5g/dl).
• Patrón 3: cogemos 0'5 ml del patrón 2 y le añadimos 0'5 ml de agua destilada (concentración; 3'75g/dl).

-En cada tubo de ensayo, con un rotulador de vidrio, escribimos en cada uno lo que contendrá (blanco, patrón 1, patrón 2, patrón 3).

-Preparamos los tubos de ensayo de la siguiente manera:

-Una vez mezclado, incubamos los tubos 3 minutos a temperatura ambiente.

-En cada una de las cubetas escribimos lo mismo que en en los tubos de ensayo y le añadimos lo de los tubos de ensayo.

-Preparamos el espectrofotómetro para la absorbancia con las siguiente condiciones:

• Longitud de onda: 540 nm.
• Volumen: 100
• Tempertura: 0
• Tiempo: 0

-Vamos colocando cada una de las cubetas en su orden (blanco, patrón 1, patrón 2, patrón 3, muestra 1 y muestra 2) para que el espectrofotómetro vaya absorbiendo.

-Vamos anotando las absorbancias que salgan.

-Una vez anotadas todas, realizamos una curva de calibración.

• Colocamos en el eje Y la absorbancia, y en el eje X la concetración.
• Anotamos, en la gráfica, las absorbancias de los tes patrones.
• Realizamos una recta que pase lo más próximo posible de los tres puntos.
• Anotamos las aborsbancias de las dos muestras.

Observaciones:  Los resultados de la concentración de las muestras es más exacto con la fórmula de la recta, así pues para la interpretación de los resultados cogeremos esos.
Resultados: 

Patrón 1: [Hb]=15g/dl; A=0'136

Patrón 2: [Hb]= 7'5g/dl; A=0'069

Patrón 3: [Hb]=3'75g/dl; A=0'056

Muestra 1: [Hb]=0'260/0'136x15=28'67g/dl; A=0'260

Muestra 2: [Hb]= 0'206/0'136x15=22'720g/dl; A=0'206

Interpretación de los resultados:  Los valores normales de concentración de la hemoglobina son:
Varones --> 14-18 g/dl
Mujeres --> 11-16 g/dl
Niños -->10-14 g/dl
Nuestros resultados son más elevados que los valores normales, eso puede deberse a una sangre ya estropeada (demasiado tiempo en la nevera)
Hoja de trabajo
1.¿En qué se basan los métodos de determinación de la hemoglobina? Se basan en las propiedades fisicoquímicas de la molécula de hemoglobina.

2.¿Cuál es el método más recomendado por el Comité internacional para la estandarización de la Hematología? El método mas recomendado es el método colorimétrico de la cianometahemoglobina.
3.¿De dónde procede el 20 de la fórmula para calcular la concentración?