PRUEBA DE LA SACAROSA

Fecha: 27 de febrero, 2015

Fundamento: Realizar la prueba de la sacarosa para determinar si existe o no HPN (hemoglobinuria paroxística nocturna).

Material: Pipetas pasteur, pipetas graduadas, micropipeta, punta de micropipeta, tubos de centrífuga, reloj, centrífuga, espectrofotómetro, rotulador de vidrio, gradilla, cubetas de espectrofotómetro.
Reactivos:  Solución acuosa de sacarosa (9'24%), sangre control, solución acuosa de amoniaco (0'04%) y suero fisiológico.
Muestra:  sangre venosa, completa y anticoagulada con oxalato cálcico, EDTA o ACD
Desarrollo: 
-Rotulamos 3 tubos. Uno con las siglas SF (suero fisiológico), otro con las siglas SC (sangre control) y otro con las siglas SP (sangre problema).
-Rellenamos los tubos de la siguiente manera:

-Agitamos suavemente los tubos y los dejamos en reposo a temperatura ambiente durante 30 minutos.

-Centrifugamos los tubos a 2.000 rpm durante 5 minutos.

-Para realizar la lectura espectrofotométrica se realiza de la siguiente manera:

• Preparamos otros tres tubos y los rotulamos, uno con TB (tubo blanco), otro con TPr (tubo patrón) y el otro con TPa (tubo problema).
• Rellenamos los tubos de este modo:

                                   

• Homogenizamos los tubos y añadimos en cada cubeta de espectrofotómetro cada tubo.
• Los colocamos en el espectrofotómetro y se anota la absorbancia de cada uno.

Observaciones:  La sangre utilizada es extraída de la bolsa de la nevera, que lleva mucho tiempo, por lo que la sangre esta hemolizada y los resultados obtenidos no son buenos.
Resultados: 

Los resultados obtenidos se pueden observar de dos maneras: lectura visual y lectura espectrofotométrica.
Lectura visual:

Lectura espectrofotométrica:

Interpretación de los resultados: En los tubos de la lectura visual en el SF y SC no deberían salir hemólisis ya que éstos funcionan como control negativo.
El grado de positividad que se produce en la HPN oscila entre el 10 y el 80% de hemólisis.
Hoja de trabajo
1.¿Con qué se hemolizan los hematíes vertidos en el tubo problema? Con una solución de sacarosa.

2.¿A qué concentración se prepara la solución de sacarosa? Se prepara a una concentración del 9'24%.

3.¿Cómo se llama también a la sacarosa? También se le denomina azúcar común

4.¿Qué es el ACD? 

5.¿Cómo se prepara el tubo blanco? Se prepara con 5 ml de una solución de amoniaco, y 0'3 ml de suero fisiológico.

6. ¿Qué porcentaje de hemólisis suele producirse, con la prueba de la sacarosa, en la sangre de la HPN?  Oscila entre un 10 y un 80% de hemólisis.