DETERMINACIÓN CELULAR EN TUBO

Fecha: 23 de abril, 2015

Fundamento: Observar la presencia o no de aglutinación en los hematíes problemas, al enfrentarlos a sueros conocidos que poseen anticuerpos frente a esos antígenos.

Material:  Tubos de centrífuga, rotulador de vidrio, gradilla, pipetas pasteur, pipeta, prepipeta, micropipeta, centrífuga.
Reactivos:  suero anti-A, suero anti-B, suero anti-AB y solución salina fisiológica.
Muestra:  sangre total anticoagulada
Desarrollo:  
-Primeramente realizaremos el lavado de hematíes de la siguiente manera:

• Añadimos 1 ml de sangre problema y 3 ml de solución salina en un tubo de centrífuga, en otro tubo realizamos lo mismo con otra sangre problema o  con agua destilada (para compensar la centrífuga)
• Centrifugamos la sangre a 2.000 rpm durante 4 minutos.
• Decantamos el sobrenandante.

-Una vez tengamos los hematíes, realizaremos una suspensión de hematíes al 2%: Cogeremos 100 microlitros de hematíes (la parte de abajo de el lavado de hematíes) y le añadimos 4,9 ml de solución salina (o 2 gotas de hematíes y 5 ml de solución salina).
-Rotulamos tres tubos de ensayo con las letras A, B y AB.
-Añadimos a cada tubo una gota de la suspensión de hematíes al 2% y dos gotas de suero anti-A, en el tubo A, de suero anti-B, en el tubo B, y de suero anti-AB, en el tubo AB.
-Centrifugamos los tubos durante a 1.000 rpm durante 1 minuto y observamos los tubos.
Observaciones:  Para observar si hay aglutinación o no, golpearemos suavemente el fondo de cada tubo para desprender el sedimento.

Resultados: 

Interpretación de los resultados: En observar los tubos, no existe aglutinación ninguna, por lo que nuestra sangre problema es del Grupo 0.
Hoja de trabajo
1.¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis? Es la misma técnica que la determinación en porta, es decir, la aglutinación de los hematíes. 

2.¿A qué concentración se prepara la suspensión de hematíes problema? La suspensión se prepara a una concentración del 2% 

3.¿Cómo se ve una aglutinación positiva? Se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento.

4.¿A qué se debe el fenómeno Rouleaux? Se debe al no realizar el lavado previo de los hematíes problema

5.¿Cómo se pueden evitar los falsos positivos? Se pueden evitar realizando un lavado previo de los hematíes.

DETERMINACIÓN CELULAR EN PORTA

Fecha: 22 de abril, 2015

Fundamento: Observar la aglutinación de los hematíes enfrentados a una serie de antisueros conocidos (anti-A y anti-B) para determinar el grupo AB0 del individuo.

Material:  Lancetas, rotulador de vidrio, gasas, portaobjetos, palillos mezcladores y capilar

Reactivos: Alcohol, suero anti-A, suero anti-A1, suero anti-A2 y suero anti-B
Muestra:  Sangre capilar
Desarrollo:  
-Dividimos un portaobjetos en dos secciones con el rotulador de vidrio y marcamos con la letra A una parte y la otra con la letra B.
-Con una lanceta, nos extraemos sangre y la colocamos en un capilar heparinizado.
-Colocamos una gota de suero anti-A en la sección A y otra gota en el suero anti-B en la sección B.
-Con el capilar, añadimos una gota de sangre al lado de cada gota de suero.
-Mezclamos la gota de sangre con la de suero, con el palillo mezclador
-Observamos la presencia o ausencia de aglutinación.
-En caso de salirnos A, volver hacer el procedimiento con los sueros anti-A1 y anti-A2 para determinar el tipo de A.
-Realizamos una gráfica con los diferentes grupos sanguíneos de las personas de la clase.
Observaciones: Hay aglutinación cuando aparecen unos grumos rojos que flotan en un líquido claro. En el caso contrario, los hematíes permanecen en forma de suspensión homogénea de color rojizo.

Resultados: 

Nuestra muestra

Los resultados de los grupos sanguíneos de la clase son los siguientes:

El gráfico sería así: Gráfica grupo AB0

Interpretación de los resultados: 
La presencia o ausencia aglutinación puede parecer de la siguiente manera:

En nuestro caso la muestra se ha aglutinado con el suero anti-B por lo tanto, el grupo sanguíneo de la muestra es el Grupo B.
Hoja de trabajo
1.¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis? La aglutinación de los hematíes enfrentados a una serie de antisueros.

2.¿Qué muestra utilizamos? Sangre capilar o sangre total anticoagulada, citratada u oxalada.

3.¿Cómo se ve la aglutinación positiva? Se observan unos grumos rojos que flotan sobre el líquido

4.¿Qué debemos hacer si el grupo obtenido es A? Reexaminar la reacción del anti-A al cabo de 2 minutos para comprobar que no se ha pasado por alto ninguna reacción débil. Además luego debemos realizar la misma prueba con anti-A1 y anti-A2.